Nexera-e

Nexera-e所提供的全二維液相色譜法通過(guò)將兩種獨(dú)立的分離模式相結(jié)合，進(jìn)一步拓展了液相色譜法的可能性。

在藥物雜質(zhì)、蛋白質(zhì)酶解物、食品提取物等天然物質(zhì)或合成聚合物等復(fù)雜樣品的分析，利用Nexera-e所得到的新的分析結(jié)果，加深了對(duì)分析對(duì)象的理解，獲得全新的見(jiàn)解。

通常的一維LC無(wú)法獲得的高分離得以實(shí)現(xiàn)

在1個(gè)峰內(nèi)含有若干成分吧？樣品越復(fù)雜、類(lèi)似成分越多，則在1個(gè)峰中越有可能含有多個(gè)成分。單一分離系統(tǒng)無(wú)法分離的成分，如果使用互相獨(dú)立的2個(gè)系統(tǒng)的話(huà)，則可以實(shí)現(xiàn)分離。

如上例所示的峰，在單一分離系統(tǒng)中重疊的成分，通過(guò)使用2個(gè)分離系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了分離。另外，1維LC確認(rèn)到74個(gè)峰，而通過(guò)使用Nexera-e，在同一分析時(shí)間內(nèi)檢測(cè)出超過(guò)200個(gè)峰。

更大限度利用2個(gè)不同分離系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)全2維分離

全二維液相色譜將兩種獨(dú)立的分離系統(tǒng)加以結(jié)合，可大幅度地提高分離性能，是全新的分析方法。通過(guò)多個(gè)分離系統(tǒng)的組合，可以分離使用一維LC難以分離的成分，為此，可應(yīng)用于復(fù)雜樣品的分析。另外，與一般的二維LC不同，獲取的數(shù)據(jù)反映出第1維與第2維雙方的分離結(jié)果，可更大限度地應(yīng)用雙方的分離系統(tǒng)。

復(fù)雜樣品分離不充分，造成峰重合

將一維分離的成分進(jìn)一步以第2根色譜柱進(jìn)行分離， 即使復(fù)雜的樣品也可實(shí)現(xiàn)高分離

通常的1維LC與Comprehensive 2D-LC的差異

全二維液相色譜將一維系統(tǒng)的洗脫液在二維譜圖上進(jìn)一步細(xì)致地分割解析，在線(xiàn)連續(xù)地在二維系統(tǒng)實(shí)施分離。通過(guò)2個(gè)環(huán)路的閥構(gòu)成一維與二維系統(tǒng)相交的流路結(jié)構(gòu)，切換閥使這些環(huán)路交替地重復(fù)進(jìn)行一維洗脫液分割和向二維系統(tǒng)注入的動(dòng)作。

全二維液相色譜系統(tǒng)的流路與動(dòng)作

在二維譜圖上解析各成分

全二維液相色譜分析的優(yōu)點(diǎn)不僅僅是高分離。在二維譜圖上，維軸與第二維軸可分別為不同的分離條件，因此，各成分的物性與圖上的位置相關(guān)。在二維譜圖上進(jìn)行解析，可對(duì)具有類(lèi)似結(jié)構(gòu)的化合物分組，可直接觀察到各成分群，或在圖上解析未知成分的性質(zhì)。

 磷脂39成分的同時(shí)分析
PG：磷脂　PE：磷脂酰乙醇胺  PA：磷脂酸
PI：磷脂酰肌醇  PS：磷脂?！C：磷脂酰

磷脂各成分通過(guò)第1維正相系統(tǒng)基于極性基團(tuán)種類(lèi)進(jìn)行分離，通過(guò)第2維反相系統(tǒng)基于脂肪酸鏈長(zhǎng)進(jìn)行分離。

上圖按種類(lèi)分組表示各成分。

磷脂有以正離子模式較強(qiáng)檢出的成分和以負(fù)離子模式較強(qiáng)檢出的成分，但利用LCMS-8050的高速正負(fù)離子切換［UFswitching］檢測(cè)，可以在1次分析中獲得兩組數(shù)據(jù)。

二維數(shù)據(jù)變換與二維數(shù)據(jù)上的定性?定量解析

數(shù)據(jù)采集所獲得的數(shù)據(jù)通過(guò)全二維液相色譜解析軟件ChromSquare變換為二維等高線(xiàn)數(shù)據(jù)。色譜圖上的峰在等高線(xiàn)數(shù)據(jù)上被識(shí)別為點(diǎn)，以這個(gè)點(diǎn)為單位進(jìn)行定性·定量解析處理。

磷脂標(biāo)準(zhǔn)樣品的LC×LC/MS數(shù)據(jù)解析
（左上：等高線(xiàn)圖（放大），左下：MS譜圖，右上：第2維的色譜圖，右下：等高線(xiàn)圖（整體）） 

隨著指針的移動(dòng)，顯示表示MS譜圖。比如，可以對(duì)有特征的點(diǎn)簡(jiǎn)便地使用MS譜圖進(jìn)行定性分析。

與通常的HPLC分析相同，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的分析結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行未知樣品的定量分析。

Comprehensive Chromatography

全二維色譜法

全二維色譜技術(shù)作為可以迅速、多方位地解析復(fù)雜樣品中成分的微小差異的有效分離技術(shù)，近年來(lái)，在香料、環(huán)境、化學(xué)等領(lǐng)域的需求日益增加。

磷脂

全二維液相色譜分析的優(yōu)點(diǎn)不僅僅是高分離。在2維譜圖上，第1維軸與第2維軸可分別為不同的分離條件，因此，各成分的物性與圖上的位置相關(guān)。在2維譜圖上進(jìn)行解析，可對(duì)具有類(lèi)似結(jié)構(gòu)的化合物分組，可直接觀察到各成分群，或在圖上解析未知成分的性質(zhì)。

磷脂39成分同時(shí)分析
PG：磷脂　PE：磷脂酰乙醇胺  PA：磷脂酸
PI：磷脂酰肌醇  PS：磷脂?！C：磷脂酰

磷脂各成分通過(guò)第1維正相系統(tǒng)基于極性基團(tuán)種類(lèi)進(jìn)行分離，通過(guò)第2維反相系統(tǒng)基于脂肪酸鏈長(zhǎng)進(jìn)行分離。

上圖按種類(lèi)分組表示各成分。
磷脂有以正離子模式較強(qiáng)檢出的成分和以負(fù)離子模式較強(qiáng)檢出的成分，但利用LCMS-8050的高速正負(fù)離子切換［UFswitching］檢測(cè)，可以在1次分析中獲得雙方數(shù)據(jù)。 

礦物油的芳烴類(lèi)(MOAH)的分析

從原油經(jīng)過(guò)各蒸餾、提純過(guò)程生產(chǎn)出的礦物油產(chǎn)品含有礦物油飽和烴類(lèi)(MOSH)、礦物油芳烴類(lèi)(MOAH)。近年，發(fā)生了礦物油混入食品危害健康的問(wèn)題?；烊朐纯赡苁前b材料的印刷油墨直接混入，或是作為再生原料的報(bào)紙上的油墨等。在此介紹基于GC×GC的意大利面的MOAH分析。

在礦物油分析中，首先提取粉碎樣品，然后分離MOSH成分與MOAH成分，并進(jìn)行定量。比如，使用Ag硅膠SPE小柱在線(xiàn)SPE法分離的樣品分割中還出現(xiàn)了目標(biāo)成分之外的峰，妨礙定量。對(duì)此峰進(jìn)行解析還有助于確定污染源。

下圖是GC×GC分析市售意大利面的MOAH分割的結(jié)果。在MOAH Cloud上存在強(qiáng)峰，通過(guò)質(zhì)譜譜庫(kù)檢索，確認(rèn)了峰成分。大多是脂類(lèi)化合物。MOAH定量使用GC×GC-FID，對(duì)對(duì)應(yīng)面積積分區(qū)域部分進(jìn)行積分，然后扣除不要要的峰強(qiáng)度，得到了1.6mg/Kg(C<25)的結(jié)果。在包裝前測(cè)定的意大利面樣品中不含一系列的脂類(lèi)化合物，因此，可以污染認(rèn)為是來(lái)自包裝。

意大利面的MOAH分割的GCｘGC-qMS色譜圖
(1st色譜柱：SLB-5ms（L=30m, i.d.=0.25mm, df=0.25µm), 2nd色譜柱：Supelcowax-10（L=1m, i.d.=0.1mm, df=0.10mu;m),調(diào)制時(shí)間：6sec)

柑橘精油的GC×GC-MSMS分析

島津的三重四極桿型質(zhì)譜儀GCMS-TQ8030可高速實(shí)施掃描模式、MRM數(shù)據(jù)采集，還可進(jìn)行scan/MRM同時(shí)測(cè)定。在此，介紹基于GCMS-TQ8030的scan/MRM同時(shí)測(cè)定模式的柑橘精油非目標(biāo)定性分析，以及食品添加劑所含柑橘油的MRM目標(biāo)分析的例子。1st色譜柱使用SLB-5ms，2nd色譜柱使用IL-60。

下圖表示掃描部分的2維色譜圖。另外，列表表示通過(guò)譜圖相似度檢索一致的不同極性的16種單/倍半萜。

Q3掃描部分的柑橘精油的2維色譜圖和鑒定結(jié)果
（調(diào)制時(shí)間：5sec)

進(jìn)行了3種保存劑——鄰苯基酚 (OPP)、丁基羥基甲苯 (BHT)、丁基羥基苯甲醚 (BHA)的MRM目標(biāo)定量分析。對(duì)于OPP在0.1 ppm-100 ppm范圍，而對(duì)于BHA和BHT在0.5 ppm-200 ppm范圍測(cè)定了標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。下圖表示1 ppm水平的MRM的2維色譜圖。從柑橘精油檢測(cè)出57 ppm的OPP，未檢出BHT和BHA。(BHT和BHA的LOD分別為3 ppb、11 ppb。)

1ppm水平的內(nèi)標(biāo)IS(,4-二溴苯)、BHT、OPP、BHA的
MRM GC×GC-MSMS 2維色譜圖。

進(jìn)行通常GC/MS/MS的MRM而有峰重疊的情況下，如果使用GCxGC-MSMS，則有可能實(shí)現(xiàn)色譜分離。

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馬黛茶的分析

馬黛茶作為恢復(fù)疲勞的滋補(bǔ)劑或興奮性飲料，在南美各國(guó)被普遍消費(fèi)。對(duì)從巴西超市買(mǎi)來(lái)的馬黛茶樣品(Ilex paraguariensis的枝葉）的揮發(fā)成分進(jìn)行了GCｘGC分析。

馬黛茶的GCｘGC-qMS色譜圖
（1st色譜柱：SLB-5ms（L=30m, i.d.=0.25mm, df=0.25μm), 2nd色譜柱Equity 1701（L=1.5m, i.d.=0.1mm, df=0.1μm), 調(diào)制時(shí)間：6sec)

一維色譜柱使用微極性色譜柱，二維色譜柱使用具有適合高速分析的尺寸的中極性色譜柱。得到的二維色譜圖上檢測(cè)出很多的成分，在二維圖的下部（低極性區(qū)域）檢測(cè)出烴組，并且，檢測(cè)出引人注目的化合物。

通過(guò)實(shí)施質(zhì)譜圖譜庫(kù)檢索，在檢出的1000個(gè)以上的峰中，可鑒定241個(gè)?？芍?，GCｘGC是分析復(fù)雜樣品的有效手段。

馬黛茶的GCｘGC-qMS色譜圖和鑒定結(jié)果例